2×Multiplex Probe QPCR Master Mix Með UDG（Engin ROX）

 

Vöruheiti	Cat.No.	Spec.
2×Multiplex Probe qPCR Master Mix með UDG (engin ROX)	G3347-01	1 ml
	G3347-05	5×1 ml
	G3347-15	15×1 ml

 

 

Varan er 2×flúrljómunar magn PCR forblanda (Engin ROX) byggt á rannsakaaðferð, hún inniheldur heitræsta TaqDNA pólýmerasa, dNTP og nauðsynlega biðminni hluti, og getur samtímis framkvæmt allt að fjórfalda flúrljómunar magn PCR hvarf í sama hvarfglasinu. Forblandan inniheldur ekki leiðréttingarlitarefni og hentar vel fyrir búnað án ROX leiðréttingar. Með því að bæta bláum litarefni sem ekki er flúrljómandi við þessa vöru getur komið í veg fyrir sýnatökuvillur. Að auki inniheldur varan einnig Uracil-DNAGlycosylase (UDG) og sérstakt bjartsýni dUTP viðbótarmagn, sem getur komið í veg fyrir leifar af sniðmáti mengun og bætt sértækni, næmi og nákvæmni vörunnar.

 

 

Sendu með blautum ís og geymdu við -20 gráðu; gildir í 12 mánuði.

 

 

Íhlutanúmer	Hluti	G3347-01	G3347-05	G3347-15
G3347-01	2×Multiplex Probe qPCR Master Mix með UDG (engin ROX)	1 ml	5×1 ml	15×1 ml
Handbók		Eitt eintak

 

 

1. Krafist er rauntíma flúrljómunar magns PCR tækis.

2. Sérstakar qPCR hvarfrör eða hvarfplötu fyrir tilraun eru nauðsynlegar.

3. Nauðsynlegt er að QPCR ræsir og rannsaka (viðmiðunar primers og rannsaka hönnunarreglur).

 

 

1. Mæli með PCR hvarfkerfi:

Hluti	20 μL rxn	Lokastyrkur
2×Multiplex Probe qPCR Master Mix með UDG (engin ROX)	10 μL	1×
Áfram grunnur (10 μM)a	Breytilegt	0.1~0.5 μM
Reverse Primer (10 μM)a	Breytilegt	0.1~0.5 μM
Kanni (10 μM)a	Breytilegt	0.1~0.5 μM
Sniðb	Breytilegt	eins og krafist er
Kjarnalaust vatn	Bætið við 20 μL

 

a. Venjulega er hægt að fá góð mögnunaráhrif með lokastyrknum {{0}},2 μM. Þegar hvarfvirkni er léleg er hægt að stilla grunnstyrkinn á bilinu 0.1~0.5 μM.

b. Magn sniðmátsuppbótar er mismunandi eftir fjölda afrita af markgenum í sniðmátlausninni. Gradient þynntu sniðmátið og athugaðu viðeigandi magn af sniðmáti. Í 20 μL hvarfkerfinu ætti magn DNA sniðmáts að vera minna en 100 ng. Þegar cDNA (RT hvarflausn) af RT-PCR hvarfi er notað sem sniðmát, ætti magnið sem bætt er við ekki að fara yfir 10% af heildarrúmmáli PCR hvarflausnarinnar.

 

2. PCR hvarfaðferð (hægt að stilla í samræmi við líkanið):

A. Tveggja þrepa aðferð					B. Þriggja þrepa aðferð
Sviði	Skref	Hringrás	Temp	Tími	Sviði	Skref	Hringrás	Temp	Tími
Stig 1	UDG ræktun	1	50 gráður	2 mín	Stig 1	UDG ræktun	1	50 gráður	2 mín
Stig 2	Fyrir- denaturation	1	95 gráður	30 sek	Stig 2	Fyrir- denaturation	1	95 gráður	30 sek
Stig 3	Denaturation	40	95 gráður	15 sek	Stig 3	Denaturation	40	95 gráður	15 sek
	Hreinsun / Framlenging		60 gráður	30 sek		Hreinsun		55-65 gráðu	10 sek
						Framlenging		72 gráður	30 sek

a. Til að bæta sérhæfni mögnunar er hægt að nota tveggja þrepa aðferðina eða hækka hitastigið við glæðingu. Til að bæta mögnunarvirknina er hægt að nota þriggja þrepa aðferðina eða lengja framlengingartímann.

 

 

1. Eftir þíðingu, vinsamlegast blandaðu varlega upp og niður, ekki hvirfla, forðast loftbólur, blandaðu vel fyrir notkun.

2. Þegar hvarflausnin er útbúin, vinsamlegast settu hvarfefnið á ísinn.

3. Varan inniheldur flúrljómandi litarefni, þannig að forðast skal sterkt ljós þegar qPCR hvarflausn er útbúin.

4. Nota skal nýja einnota ábendingar til að útbúa hvarfblöndur til að forðast krossmengun.

5. Forðastu frostþíðingarlotur Master Mix og reyndu að nota hana upp innan mánaðar eftir þíðingu.

 

 

ABI: PikoRealTM Cycler;

Bio-Rad: CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ5™, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™;

Eppendorf: Realplex 2s, Mastercycler® ep, realplex;

IIIumina: Eco QPCR;

Cepheid: SmartCycler®;

Qiagen Corbett: Rotor-Gene® röð;

Roche: LightCycler™ röð;

Takara: Thermal Cycler Dice röð;

Analytikjena: qTOWER röð;

Hangzhou Bori: LineGene röð;

 

 

Taqman grunnur hönnunarregla

1. Ákvarðu rannsakann áður en grunnur eru hannaður.

2. Þegar grunnur er hannaður, farðu eins nálægt rannsakandanum og hægt er án þess að skarast rannsakann.

3. Forðastu að nota 4 eða fleiri G í röð.

4. Tm gildi hvers grunns ætti að vera 58~60 gráður.

5. Síðustu 5 núkleótíðin í lok primersins mega ekki hafa meira en 2 G og C.

6. Primers ættu ekki að innihalda sjálfuppfyllandi raðir, annars mynda þeir hárnælurnar.

7. Til þess að forðast mögnun erfðamengisins er best að hanna primera þvert á exons.

8. Lengd mögnunarafurðarinnar ætti að vera 50~150 bp til að ná sem bestum PCR skilvirkni.

9. Engar aðrar ósértækar vörur fundust í samanburðarniðurstöðum á NCBI.

 

 

1. Lengd rannsakans ætti að vera 13~25 bp (13~30 bp ef hefðbundin TaqMan sonde er notuð).

2. Tm gildið ætti að vera 65 gráður ~70 gráður, sem er venjulega 5 gráður ~10 gráður hærra en TM gildi grunnsins til að tryggja að rannsakandinn binst helst markgeninu meðan á blöndun stendur.

3. Fyrir primer ætti innihald gúanín-sýtósíns (G+C) að vera á milli 40% og 70%.

4. 5 'endinn á rannsakandanum ætti að forðast að nota G, því 5' endinn G mun hafa slökkviáhrif, jafnvel þótt hann sé skorinn af.

5. Í allri könnuninni er innihald C augljóslega hærra en G, og hátt innihald G mun hafa slökkviáhrif, þannig að við getum valið aðra pöruðu keðju sem rannsaka.

Taqman MGB rannsaka hönnunarreglu

1. Skýrslulitur (til dæmis FAMTM) er festur á 5' enda rannsakans.

2. Það er non-fluorescence quenching group (NFQ) í 3' enda rannsakans.

3. Hlutinn af MGB er festur við NFQ og MGBs eykur glæðingarhitastigið (Tm) án þess að auka lengd rannsakans, þannig að hægt er að hanna styttri nema, en ekki minna en 13 bp.

4. Í grundvallaratriðum, svo lengi sem það er basastökkbreyting í MGB rannsakanum, getur MGB greint hana (MGB rannsakandinn mun ekki bindast markgeninu og mun ekki framleiða flúrljómun).

 

Aðeins til rannsóknarnotkunar!

 

 

maq per Qat: 2×multiplex sonde qpcr master mix með udg（none rox）, Kína 2×multiplex sonde qpcr master mix með udg（none rox） framleiðendur, birgjar, verksmiðja