Lyso-Tracker Green

Lyso-Tracker Green (DND-26), lysosomal grænn flúrljómandi rannsaka, er hægt að nota til að lita sérstaklega lysosomes í lifandi frumum. Nemandinn er samsettur úr flúrljómandi hópi og tengdum veikum basum, sem geta frjálslega farið inn í frumur og safnast saman að lýsósum með veikt súrt innra umhverfi og þannig gert sér grein fyrir merkingu lýsósóma.

Skip með þurrís; Geymið við -20 gráðu fjarri ljósi í 12 mánuði.

1. Undirbúningur greiningarlausnar:

1.1. Þessi vara er 1 mM geymslulausn sem er hituð aftur í stofuhita fyrir tilraunir og skilin í skilvindu stuttlega á lágum hraða til að tryggja að hvarfefnin sökkvi niður í botn rörsins;

1.2. Það er þynnt með stuðpúða (Hanks, PBS o.s.frv., Hanks er mælt með) eða grunnmiðli (án sermi), í lysosomal prófunarvinnulausn af 50-100 nM ( Lyso-Tracker Green Fluorescent Probe Working Concentration, má vera lagað að einhverju leyti eftir aðstæðum, en til að forðast of háan styrk rannsakanda, sem mun leiða til lækkunar á sérhæfni rannsakans, sem leiðir til rangra jákvæðra og svo framvegis er mælt með því að nota lægri styrk);

2. Frumulitun (eftirfarandi siðareglur eru fyrir viðloðandi frumur; skilvindu er krafist til að skiptast á dreififrumu)

2.1. Venjulegar eða meðhöndlaðar frumur eru þvegnar 1-2 sinnum með biðminni í 3-5 mín í hvert skipti;

2.2. Bætið við forhitaðri leysiprófunarvinnulausn og ræktið í frumuræktarútungunarvél við 37 gráður í 30-60 mín. (mælt er með að fylgjast með flúrljómunaráhrifum í flúrljómunarsmásjá fyrst, ef áhrifin eru ekki augljós, ræktunartíminn hægt að framlengja á viðeigandi hátt);

2.3. Fjarlægðu ræktunarlausnina og þvoðu með jafnalausn 2-3 sinnum í 3-5 mín í hvert skipti;

3. Smásjárskoðun: Tilbúinn til athugunar undir flúrljómunarsmásjá, FITC sía var valin með örvunarbylgjulengd 504 nm og útblástursbylgjulengd 511 nm.

1. Vegna mismunandi gerða og ástands frumanna er hægt að stilla vinnustyrk litarefnisins og ræktunartímann á viðeigandi hátt; Rannsókn á innbyrðis hreyfihvörfum rannsakanna hefur sýnt að það tekur aðeins nokkrar sekúndur fyrir rannsakana að komast inn í lifandi frumur. Mikilvægt er að hafa í huga að rannsakandinn veldur „alkaliseringsáhrifum“ í lýsósóminu og því getur langvarandi ræktun valdið aukningu á sýrustigi sýrustigsins.

2. Litarefnið þarf að framkvæma lysosomal staðsetning í ástandi lifandi frumna og það er ekki hentugur fyrir síðari frumufestingaraðgerðir.

3. Þegar lifandi frumur eru litaðar og þvegnar þarf að forhita prófunarvinnulausnina og þvottapúðann við 37 gráður. Litun og þvott er framkvæmt með ræktun í hitakassa til að hafa ekki áhrif á formgerð frumanna með örvun hitastigs.

4. Auðvelt er að slökkva á flúrljómun þessa rannsaka, þannig að það ætti að mynda eins fljótt og auðið er eftir litun og allt litunarferlið þarf að vera fjarri ljósi.

5. Geyma skal rannsakendablöndur í aðskildum ílátum til að forðast endurtekna frystingu og þíðingu. Til að forðast sóun er litunarlausnin útbúin eftir þörfum, tilbúin til notkunar.

6. Fyrir heilsu þína og öryggi, vinsamlegast notaðu rannsóknarfrakka og hanska meðan á notkun stendur.

Aðeins til rannsóknarnotkunar!

maq per Qat: lyso-tracker green, Kína lyso-tracker green framleiðendur, birgjar, verksmiðju